Die Auswahl eines Cyclers für die quantitative PCR (qPCR, auch Real-Time PCR oder Echtzeit PCR genannt) ist entscheidend für die präzise Durchführung der Amplifikationszyklen und der Echtzeit-Detektion von DNA oder RNA. Präzision, Temperaturuniformität, schnelle Zyklen und eine zuverlässige Fluoreszenzdetektion sind die wichtigsten Eigenschaften für den Erfolg der qPCR.
Verwendung von Real-Time PCR Cyclern
Im Gegensatz zur klassischen Endpunkt PCR, bei der die DNA bzw. RNA am Ende der Amplifikation durch weiterführende Methoden wie der Gelelektrophorese oder Spektrophotometrie analysiert wird, ermöglicht die PCR mit einem Real-Time Cycler eine unmittelbare Quantifizierung dieser durch Messung der Fluoreszenzen in Echtzeit. Hierdurch können:
- wichtige Daten über die Effizienz der Reaktion,
- die Stabilität der Enzyme
- und die Qualität der Proben
gewonnen werden. Das Vorhandensein verschiedener optischer Kanäle ermöglicht zudem die zeitgleiche Analyse unterschiedlicher Zielsequenzen, welches auch als Multiplexing bezeichnet wird. Hierdurch werden nicht nur Zeit und Ressourcen gespart, sondern auch die Informationsdichte erhöht, die aus einer einzigen Probe gewonnen wird.
Dem klassischen Ablauf eines PCR-Zyklus bestehend aus der Denaturierung (bei 95 bis 98°C), dem Primer Annealing (Temperaturbereich zwischen 55 bis 60°C) und der Elongation (bei 60 bis 72°C) wird eine zusätzliche Fluoreszenzmessung nach Elongation angehangen und die Messwerte in Echtzeit graphisch dargestellt.
Nach vollständig beendeter qPCR stehen für die anschließende Auswertung leistungsstarke Softwareprogramme zur Verfügung. Die Datenweitergabe erfolgt idealerweise direkt an einen mit dem qPCR Cycler verbundenen Computer.
Diese Eigenschaften machen einen qPCR Cycler aus
Die Real-Time Cylcer von Biozym bieten folgende Vorteile:
- Präzise Temperaturkontrolle um eine höchstmögliche Effizienz der PCR zu erhalten.
- Schnelle Heiz- und Kühlraten ermöglichen eine verkürzte Laufzeit der PCR und damit schnellere und präzisere Ergebnisse.
- Homogene Temperaturverteilung innerhalb des Blockes für gleichmäßige Probenbedingungen.
- Integriertes System zur Detektion der Fluoreszenz bei verschiedensten Wellenlängen.
- Multiplexing-Fähigkeit für die gleichzeitige Quantifizierung mehrerer Zielgene in einer einzigen Reaktion (Multiplex-qPCR).
- Benutzerfreundliches Interface und leistungsfähige Software um Protokolle einfach und flexibel einzurichten und Ergebnisse zu analysieren.
qPCR Cycler kaufen bei Biozym
Biozym bietet verschiedene Real-Time PCR Thermocycler an:
MIC Magnetic Induction Cycler
- Blockformat: 48 Proben (ringförmig angeordnet)
- Optische Kanäle: 2 / 4 / 4 HRM
- Relative und absolute Quantifizierung, Genotypisierung und HRM
- Wartungsfrei - keine Justierung von Optik und Temperaturen notwendig
- Extrem kompakt – Kleiner als ein DIN A4-Blatt
- Temperaturuniformität: ± 0.05 °C
Azure Cielo Real-Time PCR Cycler
- Blockformat: 96 Well
- Optische Kanäle: 3 / 6
- Relative und absolute Quantifizierung, Allel-Diskriminierung, Melt Curve, HRM, u.a.
- Stand Alone Gerät mit 10“ Touchscreen, auch vom PC aus steuerbar
- Wartungsfrei, variables Plattenformat
- Temperaturuniformität: ±0.2°C
LineGene 9600+ Real-Time PCR System
- Blockformat: 96 Well
- Optische Kanäle: 2 / 4 / 5
- Relative und absolute Quantifizierung, SNP Analysis, Melt Curve, HRM, u.a.
- Ferrotec® High-Performance Peltier-Elemente (PeltierInside)
- Wartungsfrei, Steuerung über Windows® 11 Tablet oder PC
- Temperaturuniformität: ±0,3°C
Übrigens: Entdecken Sie auch unseren PCR Thermocycler.
Passendes Zubehör für den qPCR Cycler
Biozym hat eine breite Palette an hochqualitativen PCR Consumables im Portfolio, bei denen zum Beispiel weiße Gefäßen mit optisch klaren Deckeln kombiniert werden.
Ebenfalls im Portfolio sind qPCR und qRT-PCR Kits mit verschiedenen ROX.
Für die Vorbereitung der zu analysierenden Proben bieten wir zudem Deep Well Platten und Zentrifugen an.
FAQs: Häufig gestellte Fragen zum Thema qPCR Cycler
Wofür wird ein Thermocycler in der qPCR verwendet?
Ein Thermocycler wird in der qPCR zur Amplifikation und gleichzeitiger Quantifizierung von Nukleinsäuren in Echtzeit verwendet.
Was sind die wichtigsten Eigenschaften eines qPCR Thermocyclers?
Neben Kriterien wie Probenkapazität und Anzahl der Kanäle sollte ein qPCR Cycler über präzise Heiz- und Kühlelemente verfügen und die Detektion der Fluoreszenzsignale verlässlich durchführen.
Welche Arten von Fluoreszenzfarbstoffen werden in der Echtzeit PCR verwendet?
Für die qPCR können zwei verschiedene Arten von Fluoreszenzfarbstoffen verwendet werden. Farbstoffe wie SYBR Green I können direkt an doppelsträngige DNA binden, jedoch geschieht dies relativ unspezifisch. Soll eine sequenzspezifische Bindung hergestellt werden, können unterschiedliche Arten von Sonden verwendet werden, wie z.Bsp. TagMan® Sonden.
Wofür steht die Abkürzung RT-PCR?
Die Verwendung der Abkürzung „RT-PCR“ ist nicht eindeutig, da RT-PCR sowohl als Abkürzung für Real-Time PCR, aber gleichzeitig auch als Abkürzung für Reverse Transkriptase PCR verwendet wird. Die Technik der reversen Transkription wird häufig in der Virologie angewandt, wenn RNA in cDNA umgeschrieben wird, um diese dann anschließend in der PCR zu verwenden.
